Цитологический метод изучения. Цитологическое исследование — щадящий метод ранней диагностики. Функциональные обязанности сотрудников ЦЛ

Методы исследований по использованию светового (оптического) микроскопа называют световой микроскопией . Базируются на том, что сквозь прозрачный или полупрозрачный объект исследований проходят лучи света. Дает возможность изучать общий план строения клетки и отдельных ее органелл, размеры которых не меньше 200 нм. Современные световые микроскопы имеют кратность увеличения объекта в 2-3 тыс. раз. Существуют разные виды световой микроскопии: поляризационная, флуоресцентная, ультрафиолетовая, фазово-контрастная и т. п. Под световым микроскопом можно наблюдать общее строение клеток или определенные процессы их жизнедеятельности – движение клетки, деление, перемещение цитоплазмы и т. п. Возможно прижизненное изучение клетки.

Метод электронной микроскопии

Исследование клетки с помощью электронного микроскопа называется электронной микроскопией . Способна увеличивать изображение объектов до 500 000 раз и больше. Позволяет изучать мелкие объекты, органеллы маленьких размеров (рибосомы и т. п.), строение плазматических мембран. Для электронной микроскопии препараты определенным образом обрабатывают (преимущественно тяжелыми металлами). После этого органеллы и прочие клеточные структуры приобретают разную степень поглощения электронов и потому выделяются на экране или фотопленке.

Электронный микроскоп подобен по принципу конструкции световому. В магнитном поле вместо потока света движется поток электронов от катода к аноду, который ускоряется высоким различием потенциалов между полюсами. Электромагниты выполняют роль линз. Они могут изменять направление движения электронов, собирать (фокусировать) их в пучок и направлять его на объект исследования. Часть электронов может рассеиваться, отражаться, поглощаться, взаимодействовать с объектом или проходить через него без изменений. Электроны попадают на люминесцентный экран (возбуждают его свечение), или на особую фотопленку (можно фотографировать изображение объекта).

Метод трансмиссионной электронной микроскопии

Метод трансмиссионной электронной микроскопии – при рассеивании пучка электронов объектом создается изображения на флуоресцентном экране микроскопа. Чем больше способность рассеивать поток электронов тем или иным участком, тем более темными они выглядят на экране.

Метод растровой (сканирующей) электронной микроскопии

Метод растровой (сканирующей) электронной микроскопии позволяет изучить трехмерное изображение поверхности клетки вследствие пробегания пучка электронов по поверхности объекта.

Метод меченых атомов

Метод меченых атомов: для изучения места хода тех или других биохимических процессов в клетку вводят вещество, в котором один из атомов определенного элемента замещен его радиоактивным изотопом (кислорода, углерода, азота, фосфора). С помощью особых приборов, способных фиксировать эти изотопы, определяют локализацию и характер биохимических процессов, можно проследить за миграцией изотопов в клетке.

Метод фиксирования живых объектов

Метод фиксирования живых объектов используют, применяя определенные вещества (формалин, спирты и т. п.), или быстрым замораживанием, или высушиванием.

Особыми красителями окрашивают отдельные структуры фиксированных клеток. Эти красители окрашивают только определенные структуры клетки, что позволяет получить их контрастную окраску.

Метод центрифугирования

Метод центрифугирования применяют для изучения отдельных клеточных структур. Измельченные объекты размещают в центрифуге. При очень быстрых оборотах эти объекты будут оседать слоями, так как разные клеточные структуры имеют неодинаковую плотность.

Более плотные органеллы будут оседать на дне. Слои разделяют и изучают в отдельности.

Цель проведения данного анализа — определить тип зафиксированных поражений, их доброкачественную или злокачественную природу. Разберемся подробнее в этом вопросе.

Клетка является основным строительным материалом организма. От ее качества напрямую зависит уровень здоровья человека и его способность противостоять разнообразным патологиям. Изучение клеток позволяет выявлять начало патологических изменений, контролировать ход терапии и устойчивость полученного результата. Исследование структуры клеток носит название цитологического.

Суть таких исследований

Суть цитологического метода заключается в анализе особенностей клеточного состава определенного биоматериала при помощи микроскопа: изменений в цитоплазме, ядрах. Как правило, под цитологией понимают исследование гинекологического характера, однако данный метод исследования может применяться для изучения сока из предстательной железы, отпечатков удаленных тканей, синовиальной жидкости, мокроты.

Что выявляют во время данного анализа?

Цитологический метод исследования позволяет выявить нарушения в гормональных функциях яичников. А изучение мазков, взятых с влагалищного свода и маточной шейки, позволяет обнаружить онкологические заболевания на ранних стадиях и предраковые состояния. Кроме того, исследование позволяет выявить рак предстательной железы, мочевого пузыря, желудка, легких и иных органов. Также представляется возможным выявление гистологической формы опухолевого образования, определение распространенности злокачественного образования, распознание метастаз. Но целью цитологического исследования является не только рак, но и аутоиммунные патологии, воспалительные, вирусные заболевания. При помощи подобного анализа также можно следить за скоростью регенерации тканей.

Показания к проведению

Назначить цитологический метод исследования может гинеколог, онколог, хирург, терапевт. Основными показаниями для этого являются:

• Подозрение на вирусное заражение, раковое заболевание, процесс воспаления. В этом случае исследование необходимо для уточнения предполагаемого диагноза.
• Подтверждение онкологии при резекции тканей.
• Отслеживание динамики терапии разнообразных патологий.
• Контроль терапевтических результатов.
• Профилактический скрининг.
• Контроль состояния при наличии возможности рецидива. В обязательном порядке цитологические исследования проводятся после излечения рака.

Чем отличаются цитологический и гистологический метод исследования? Об этом ниже.

Отличие цитологического анализа от гистологического исследования заключается в том, что изучаются клетки, а не срезы тканей. А значит, заключительные выводы делаются на основе изменений, происшедших в ядре, цитоплазме, ядерно-цитоплазменном соотношении, образования комплексов и структур клеток.

Использоваться для исследования может различный биологический материал - все зависит от того, какой орган исследуется.

Биоматериал для исследования

Как правило, цитологический метод исследования (в отличие от гистологического, когда для исследования берутся части тканей, как правило, путем биопсии или их резекции) вмешательства в организм пациента не предполагает: практически все биоматериалы можно получить безболезненным способом. Исследоваться могут:

1. Соскобы, взятые с язв, эрозированных поверхностей, свищей, ран.
2. Мазки, смывы с цервикального канала и шейки матки. Цитологический метод исследования здесь используется чаще всего.
3. Амниотическая жидкость.
4. Выделения молочных желез.
5. Секрет из предстательной железы.
6. Моча.
7. Мокрота.

Однако сбор некоторых биоматериалов может доставить пациенту неприятные ощущения. Но такая процедура проводится быстро, а чаще всего собрать необходимый материал удается при проведении других исследований, что исключает новые болезненные процедуры.

Инвазивный способ

Инвазивным способом происходит сбор следующих материалов для цитологического метода изучения:

1. Пунктаты из серозных и суставных полостей (сбор происходит при помощи тонкой иглы).
2. Цереброспинальная жидкость.
3. Кровь.
4. Смывы с различных органов при эндоскопии.

Кроме того, цитологическому исследованию могут подвергаться отпечатки тканей, которые были удалены в ходе операции или взяты с целью

Полученные биологические образцы могут исследоваться разными методиками.

Основные методы цитологического исследования

В различных клиниках могут применяться разные способы такого исследования, основными среди которых являются:

Патологии, выявляемые путем такого анализа

Главным заболеванием, следы которого ищут путем цитологического исследования - рак. Кроме того, цитология позволяет выявить предраковые состояния и следующие патологии:

1. Инфаркты.
2. Патологии ЦНС воспалительного характера.
3. Зрелость плода (если проводится исследование амниотической жидкости).
4. Заболевания незлокачественного характера (сердечная недостаточность застойного типа, туберкулез, пневмония).
5. Присутствие вирусных антигенов и инфекционных агентов в образцах биоматериала.
6. Процессы воспаления, в том числе различные менингиты.

Выводы

Таким образом, методы цитологической диагностики являются одним из наиболее информативных способов изучения состояния различных органов, которые сегодня известны медицине. Они позволяют своевременно обнаружить онкологические заболевания, предраковые состояния, другие болезни.

Цитологическое исследование (греч. kytos вместилище, здесь – клетка + logos учение) – исследование, основанное на изучении с помощью микроскопа особенностей строения клеток, клеточного состава органов, тканей, жидкостей организма человека и животных в норме и при патологических процессах.

Цитологическое исследование широко применяется в биологии для изучения закономерностей строения и жизнедеятельности клетки и в медицине – для диагностики различных заболеваний. Методы цитологического исследования, используемые в судебной медицине, позволяют обнаруживать клеточные элементы повреждённых тканей на различных орудиях, транспортных средствах и др.

Отличие цитологического и гистологического исследований

Диагностическое цитологическое исследование сходно с гистологическим исследованием биопсийного материала по цели (прижизненное распознавание патологического процесса), методической основе (морфологический анализ), объекту исследования (компоненты патологических участков органа и ткани), методам окраски ядра, цитоплазмы и других структурных элементов клетки.

Однако при цитологическом исследовании, в отличие от гистологического, требуется значительно меньшее количество материала (отдельные клетки, их комплексы), из которого можно в течение нескольких минут приготовить цитологический препарат (мазок, отпечаток), как правило, без длительной предварительной обработки и не прибегая к помощи специальной аппаратуры.

Вместе с тем материал, подвергаемый цитологическому исследованию, позволяет оценивать изменения лишь на ограниченном участке. Кроме того, в процессе приготовления мазка нарушаются пространственные взаимоотношения компонентов ткани, сохраняющиеся в гистологическом срезе (лишь изредка в цитологическом препарате обнаруживаются небольшие фрагменты ткани). Таким образом, в тех случаях, когда требуется выявить взаимное расположение клеток и межклеточного вещества в исследуемых тканях, цитологическое исследование уступает гистологическому.

Цитологическое исследование предпочтительнее в тех случаях, когда невозможна или нежелательна биопсия, при необходимости детального изучения особенностей структуры клеток, быстрого получения результата (например, при обследовании больного в условиях поликлиники, массовых проф. осмотрах населения).

Различают цитологическое исследование:

• так называемого эксфолиативного материала (мокрота, моча, сок предстательной железы, смывы из различных органов во время эндоскопии, а также из шейки и полости матки, выделения из молочных желез, соскобы и отпечатки с поверхностей эрозий, язв, свищей, ран, жидкость из суставных и серозных полостей, цереброспинальная и амниотическая жидкость);
• пунктатов (материала, полученного при аспирационной диагностической пункции, преимущественно тонкой иглой)
• отпечатков с удаленных тканей, например поверхности свежего разреза оперативно удаленной или взятой для гистологического исследования ткани.

Область применения

С помощью цитологического исследования оценивают состояние эпителия, мезотелия и степень его пролиферации; гормональную активность у женщин; контролируют степень повреждения опухолевых клеток при лечении злокачественных опухолей, изменение гормонального статуса под влиянием гормональной терапии, следят за динамикой заживления ран и др.

Цитологическое исследование широко применяют во время операции для срочного решения диагностических задач (установления природы патологического процесса, выявления метастазов опухоли или её прорастания в окружающие ткани, наличия клеток опухоли в краях операционного разреза и др.). Значение такого исследования особенно велико при необходимости анализа рыхлых, крошащихся масс, костных и обызвествленных тканей или очень мелких очагов, не пригодных для срочного гистологического исследования.

При диагностике заболеваний различных органов применяют алгоритмы цитологических исследований. При этом цитологическое исследование рассматривают как неотъемлемую часть общего комплекса диагностических мероприятий. Задача алгоритма состоит в получении максимальной объективной цитологической информации в кратчайший срок, без вреда для больного, при минимальном числе исследований.

Алгоритм предусматривает необходимость первоочередного применения наиболее безопасных и эффективных способов получения материала, предпочтительность одномоментных комплексных исследований при обязательном учете особенностей течения патологического процесса, соблюдение принципа преемственности информации.

Ожидаемый результат цитологического исследования зависит от того, насколько правильно получен материал (непосредственно из участка поражения или вблизи него, из участка некроза, кровоизлияния и т. д.). Во многих случаях врач-цитолог лично участвует в проведении пункций и других манипуляций, направленных на получение материала для цитологического исследования.

Способ получения материала

Характер и способ получения материала для цитологического исследования определяется локализацией патологического процесса в том или ином органе (ткани).

При заболеваниях кожи с помощью цитологического исследования изучают соскобы и отпечатки с изъязвленной поверхности, пунктаты из патологических образований.

При поражениях мягких тканей и костей, заболеваниях щитовидной железы и органов кроветворения объектом цитологического исследования являются пунктаты из участков поражения. При заболеваниях нервной системы цитологическому исследованию подвергают цереброспинальную жидкость, при заболеваниях глаза – соскобы с поверхности конъюнктивы, пунктаты из стекловидного тела.

При диагностике заболеваний органов дыхания цитологическому исследованию подлежит мокрота, в том числе и мокрота, выделение которой индуцировано ингаляцией трипсина; материал, полученный путём соскоба, аспирации, смыва, пункции, в том числе лимфатических узлов средостения, во время бронхоскопии и трансторакальной пункции.

С целью цитологической диагностики заболеваний органов пищеварения исследуют смывы из пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки, сигмовидной и прямой кишки («слепой» способ); смывы, полученные под визуальным контролем через катетер, подведённый к участку поражения; соскобы с помощью нейлоновой щетки во время эзофагоскопии, гастроскопии, дуоденоскопии, сигмоскопии, ректоскопии; соскобы и аспирируемый материал из общего желчного и главного панкреатического протоков во время ретроградной эндоскопической панкреатохолангиографии, пунктаты из слюнных желез, печени; пунктаты, соскобы и отпечатки из различных органов брюшной полости при лапароскопии, асцитическая жидкость, полученная при лапароцентезе.

При диагностике заболеваний молочной железы изучают выделения из соска и пунктаты пальпируемых и выявленных с помощью маммографии и термографии не пальпируемых образований.

При диагностике заболеваний мужских половых органов цитологическому исследованию подвергают пунктаты из яичка и предстательной железы.

Цитологическая диагностика заболеваний органов мочевыделения основана на исследовании выделившейся мочи; остаточной мочи, полученной из мочевого пузыря катетером; смывов, соскобов, аспирируемого материала, полученных при цистоскопии и ретроградной катетеризации мочеточника и почечной лоханки, пунктата из почки.

Методы обработки материала и окраски цитологических препаратов разнообразны и зависят от цели исследования. Поскольку результат исследования часто основывается на выявлении тонких повреждений ядерных и цитоплазматических структур, необходима уверенность, что эти изменения не являются артефактами, связанными с нарушением методики обработки и окраски материала. На основании исследования адекватного и репрезентативного материала устанавливают цитологический диагноз. При этом учитывают общую картину, обнаруженную в цитологическом препарате, а не только изменения отдельных клеток, принимают во внимание анамнестические, рентгенологические, эндоскопические и другие данные.

Достоверность цитологического исследования

Как и при любом морфологическом исследовании, достоверность цитологического исследования зависит от чувствительности и специфичности метода, правильности и воспроизводимости результатов. В настоящее время повышение достоверности цитологического диагноза обеспечивается с помощью ряда объективных методов. К ним относятся цитохимические методы исследования, включая цито-спектрофотометрию и иммуноцитохимические тесты, морфометрические методы (кариометрия и цитометрия), математические методы (расчет информативности и весовых коэффициентов цитологических признаков).

Для проведения диагностического цитологического исследования часто используют поляризационную микроскопию, фазово-контрастную микроскопию, люминесцентную микроскопию. В некоторых случаях получаемые для цитологического исследования клетки с успехом культивируют в составе тканевой культуры, при этом они образуют те или иные структуры, характерные для определенной ткани, что нередко облегчает решение дифференциально-диагностических задач.

Важное значение имеет унификация и стандартизация критериев цитологического диагноза. Он может быть утвердительным с чётким определением характера заболевания, предположительным, что должно рассматриваться как указание на необходимость дополнительных диагностических исследований, и отрицательным.

Последний не исключает предполагаемого диагноза, особенно при наличии данных других диагностических методов, свидетельствующих в пользу клинического диагноза. Важным методом оценки данных цитологического исследования является также динамическое наблюдение за клиническим течением болезни после установления цитологического диагноза. Эталоном правильности цитологического диагноза в большинстве случаев являются результаты гистологического исследования. При комплексном использовании цитологического и гистологического исследований удается добиться наиболее высокого уровня достоверности морфологического диагноза.

В настоящее время цитологическое исследование все чаще является самостоятельным методом диагностики во многих областях медицины. Ниже дана краткая характеристика особенностей цитологического исследования в онкологии, акушерстве и гинекологии, хирургии.

Цитологическое исследование в онкологии

Цитологическое исследование в онкологии позволяет устанавливать принадлежность клеток к злокачественной опухоли на основании обнаружения в них большинства признаков злокачественности (полиморфизм клеток, ядер, ядрышек, атипия ядер, нарастание числа митозов и др.). Цитологическая картина обычно отражает особенности гистологического строения опухоли, степень её дифференцировки, а иногда и гистогенетические особенности. Цитологическая верификация новообразований базируется на современных гистологических классификациях опухолей с учетом возможностей цитологического метода.

Являясь эффективным методом диагностики на любом этапе прогрессии опухоли, цитологическое исследование позволяет:

1. Определить характер и степень пролиферации эпителия, мезотелия, а также наблюдать в динамике за характером клеточных изменений.
2. Диагностировать злокачественные опухоли практически любой локализации и клинической стадии (этому способствует развитие эндоскопической техники, позволяющей производить целенаправленное исследование органов, ранее недоступных морфологическому исследованию без операции).
3. Устанавливать гистологическую форму доброкачественных и злокачественных опухолей, а также степень дифференцировки злокачественной опухоли, что имеет значение для выбора рационального метода лечения и оценки прогноза заболевания.
4. Определять распространённость злокачественной опухоли, констатируя её прорастание в соседние органы, распознавая метастазы в лимфатические узлы и другие органы.
5. Оценить чувствительность опухоли к лечебным воздействиям (лучевой терапии, химиотерапии, иммунотерапии), что важно при разработке рациональных методов лечения и динамическом контроле за его результатами.

Цитологические исследования применяются при массовых проф. осмотрах населения с целью раннего выявления предопухолевых заболеваний и опухолей. Для более эффективного использования цитологического исследования в этой области разрабатываются автоматизированные статистические и проточные сканирующие системы, связанные с ЭВМ. Автоматизированный анализ цитологических препаратов способствует объективизации и стандартизации критериев цитологической диагностики.

Цитологическое исследование для установления точного диагноза опухоли осуществляется преимущественно в онкологических учреждениях. При биопсии опухолей различной локализации рационально проводить параллельно с гистологическим цитологическое исследование биопсированного кусочка, что улучшает результаты морфологических исследования опухолей.

Достоверность цитологического исследования при раке желудка, легкого, молочной и щитовидной желез, шейки матки, мочевого пузыря, прямой кишки, при злокачественных опухолях кожи, мягких тканей и костей составляет более 80%. Цитологическое исследование позволяет решать дифференциально-диагностические задачи не только при опухолях, но и при гиперпластических, метапластических, диспластических изменениях эпителия, реактивных и пролиферативных изменениях других тканей, устанавливать характер различных неопухолевых заболеваний.

Цитологическое исследование в акушерстве и гинекологии

Цитологическое исследование в акушерстве и гинекологии проводится с целью изучения клеток эпителия влагалища (кольпоцитологическое исследование), влагалищной части шейки матки, капала шейки матки и слизистой оболочки тела матки, исследования пунктата (или аспирированного материала) из опухолей женских половых органов с целью выявления особенностей гормонального статуса, предопухолевых заболеваний и рака женских половых органов.

Материалом для цитологического исследования служат влагалищные мазки, мазки-отпечатки, смывы из влагалища, поверхностные соскобы со слизистой оболочки женских половых органов, аспирированный материал из эндометрия и тканевые пунктаты (из опухолей яичников и др.). Чаще всего используют кольпоцитологическое исследование влагалищных мазков (метод Папаниколау).

Показаниями к его применению являются различные заболевания женских половых органов, при которых предполагают те или иные гормональные нарушения. Кроме того, кольпоцитологическое исследование используют для установления фаз менструального цикла, диагностики беременности, контроля за её динамикой, выявления угрозы прерывания и перенашивания беременности.

Цитологическая картина влагалищного отделяемого (мазков или смывов) зависит от суммы гормональных воздействий (эстрогенных, гестагенных, андрогенных). Влагалищный мазок состоит из клеток различных слоёв эпителия слизистой оболочки влагалища. В нем иногда встречаются также эндоцервикальные, эндометриальные клетки, эритроциты, многоядерные клетки, продукты ферментативной деятельности клеток (эстеразы, кислая фосфатаза, бета-глюкуронидаза и др.), лейкоциты, палочки Дедерлейна, клеточный детрит.

Мазки берут из заднего или задне-бокового свода влагалища с помощью деревянного шпателя, ватным или марлевым шариком, браншей пинцета или стеклянной пипеткой с резиновым баллоном. У детей и девственниц используют для этой цели желобоватый зонд, можно использовать также ушную ложечку.

За сутки до взятия мазка обследуемая не должна производить какие-либо влагалищные манипуляции и иметь половые сношения. Мазок наносят на стекло, вместе с каплей изотонического раствора хлорида натрия, и затем с помощью другого стекла размазывают её тонким слоем. Фиксацию производят подсушиванием в смеси равных частей 96% этилового спирта и эфира. Для полихромной окраски мазок лучше фиксировать смесью 97% изопропилового спирта (1/2 ч.) и ледяной уксусной кислоты (21/2 ч.).

Существуют простые и сложные методы окраски мазка. К простым методам относят окраску гематоксилин-эозином, раствором метиленового синего, фуксином и по Романовскому-Гимзе. К сложным – полихромную окраску (модифицированный метод Папаниколау-Шора), комбинированные методы окраски, окраску крезиловым фиолетовым.

Для характеристики влагалищного мазка учитывают количественное соотношение клеточных элементов с помощью специальных индексов. Наиболее часто используют кариопикнотический индекс – отношение ороговевших клеток с пикнотичным ядром к общему числу клеток; ацидофильный (эозинофильный) индекс – процент ацидофильных (эозинофильных) клеток по отношению ко всем сосчитанным; базальный индекс – процентное содержание в мазке базофильных клеток и ряд других индексов.

Кольпоцитограмма – сводные данные о характере влагалищного мазка с указанием его реакции, процентного содержания клеток разных слоёв влагалищного эпителия и наличия других элементов, например эритроцитов, гистиоцитов, лейкоцитов и др.

У новорожденных в первые 5 дней жизни под влиянием эстрогенов матери влагалищные мазки состоят преимущественно из промежуточных и базофильных клеток, с 5-го по 8-й день, когда эстрогенная стимуляция со стороны матери ослабевает, происходит десквамация клеток, и в мазке могут появиться эритроциты, с 8-го по 14-й день мазки приобретают атрофический характер, который сохраняется до 8-9-летнего возраста, когда появляются единичные поверхностные базофильные и ацидофильные клетки.

В препубертатном периоде в мазке поверхностные клетки появляются уже в большем количестве. Увеличение ацидофильного индекса – признак скорого наступления первой менструации. Цитологическая картина влагалищного мазка претерпевает изменения также в соответствии с фазами менструального цикла.

Характеризуя влияние гормонов на цитологическую картину влагалищного мазка, можно сказать, что эстрогены оказывают пролиферативное действие, проявляющееся в появлении плоских изолированных клеток поверхностного эпителия. Прогестерон способствует обратному развитию цитологической картины (десквамация, появление промежуточных клеток и их скоплений). А ндрогены вызывают «старение» мазка – пролиферацию базального и отчасти промежуточного слоя.

На цитологическую картину влагалищного мазка оказывают влияние и негормональные факторы (кератинизация влагалища, цервициты, кольпиты, спринцевания, особенно с использованием химических средств, вагинальное применение лекарственных препаратов, колец, внутриматочных противозачаточных средств). Существует зависимость между гистологической картиной слизистой оболочки влагалища и цитологической картиной влагалищного мазка. Имеется также определенная (не менее выраженная) связь цитологической картины влагалищного мазка с изменениями в эндометрии.

Однако некоторые исследователи отмечают известные расхождения между картиной влагалищного мазка и характером изменений в эндометрии, особенно при нарушениях менструального цикла. При необходимости кольпоцитограмма может быть заменена уроцитограммой, так как слизистая оболочка мочевого пузыря претерпевает сходные со слизистой оболочкой влагалища изменения (вследствие общности развития из урогенитального синуса).

Цитологическое исследование в хирургии

Цитологическое исследование в хирургии применяют чаще с целью изучения в динамике раневого экссудата. При этом удается установить характер раневого процесса, проследить эффективность обработки раны и динамику её заживления, оценить, в известной мере, иммунные свойства организма, его местные регенераторные возможности. При трофических язвах появление в препаратах-отпечатках лимфоцитов и моноцитов свидетельствует об эффективности проводимого лечения, хорошем прогнозе; наличие в экссудате большого числа плазматических клеток указывает на затяжное течение процесса.

Разработаны критерии для интерпретации цитологических данных при посттравматических и осложненных послеоперационных ранах, актиномикотических свищах, сифилитических язвах.

Большая медицинская энциклопедия 1979 г.

В настоящее время в медицине широко используют цитологические методы исследования и цитологическую диагностику для распознавания многих заболеваний.

Цитологическая диагностика базируется на исследовании микроскопической картины препарата, содержащего как отдельные клетки, так и клетки в составе ткани, а также клеточного окружения в норме и при различных патологических процессах.

Врачи-цитологи проводят профилактические исследования, ставят предварительные диагнозы и дают оценки результатов лечения.

Применяются цитологические исследования в онкологии для распознавания опухолей; в гематологии — для диагностики заболеваний и оценки эффективности их лечения; в гинекологии — с целью диагностики онкологических заболеваний и гормональных нарушений; для распознавания многих заболеваний органов дыхания, пищеварения, мочевыделения, нервной системы и т.д.

Валерий Иванович Ключников работает в должности врача-цитолога в Национальном медико-хирургическом Центре им. Н.И.Пирогова.

"В основном я провожу исследования при помощи микроскопии цитологических мазков, отпечатков, соскобов, материала полученного при биопсии и пункции", - сообщает Валерий Иванович, предоставляя часть результатов своей повседневной работы. «Микрофотографии я получаю, используя тринокулярный Микромед-1, камеру Altami USB 3150 R6 1/2 CMOS (3 Mpix) и программу 2.0.0, с помощью которой удобно проводить измерения элементов».

Рис.1. Железистый эпителий

На рисунке 1 представлена микрофотография железистого эпителия из церквикального канала. Клетки железистого эпителия обведены эллиптическими фигурами.

«Цитологические исследования цервикального канала, то есть шеечного канала матки, проводятся для профилактики предрака и рака шейки матки. На данной микрофотографии виден нормальный железистый эпителий из цервикального канала, но я считаю, что это пример плохо окрашенного мазка. По нему нельзя сделать какие-либо выводы из-за наличия артефактов. Артефакты здесь — рыхлые скопления краски (дефекты окраски мазка). Это мешающие объекты, и иногда они искажают общую картину анализа», - объясняет Валерий Иванович.

Исследование нормального пролиферативного типа мазка показано на рисунке 2 . Мазок был взят с наружной поверхности шейки матки и из цервикального канала (ЦК). «Здесь мы видим поверхностные клетки многослойного сквамозного (чешуйчатого) эпителия (МСЭ) с мелкими ядрами и скопление клеток железистого эпителия из ЦК в виде железистой структуры (полоски) с крупными гиперхромными (плотными) ядрами. В программе Altami Studio было произведено : измерен диаметр такого ядра, и величина его оказалась равной 11.46 мкм», - комментирует Ключников В.И.

Рис. 2. Измерение диаметра ядра железистого эпителия

Микрофотография на рисунке 3 с изображением мазка пролиферативного типа с наружной поверхности шейки матки. «Это нормальный мазок женщины репродуктивного (детородного) возраста. В первой фазе цикла он характеризуется обилием зрелых поверхностных клеток МСЭ. В других случаях данный тип мазка может быть признаком патологии. На микрофотографии видны клетки МСЭ с мелкими ядрами, а также присутствует мелкая палочковая микрофлора», - рассказывает врач-цитолог Валерий Иванович.

Рис. 3. Мазок пролиферативного типа

Микроскопическое исследование мазка пролиферативного типа иногда позволяет диагностировать вирусную природу патологии шейки матки (Рис. 4 ). «На этой микрофотографии я наблюдаю нормальную вагинальную палочковую микрофлору, но увеличение ядер отдельных клеток с образованием околоядерной зоны просветления (койлоцитоз). Это говорит о поражении эпителиальных клеток папиломавирусной инфекцией», - замечает Ключников В. И.

Рис. 4. Папилломавирусная инфекция (ПВИ)

На рисунке 5 представлена микрофотография мазка с наружной поверхности шейки матки женщины в состоянии менопаузы. «Здесь я могу подтвердить диагноз острого воспаления, а именно, атрофического кольпита (вагинита). На это указывает обильное скопление лейкоцитов и увеличение ядра клеток. В Altami Studio был измерен диаметр произвольно выбранного на микрофотографии ядра. Диаметр был равен 14.71 мкм», - отвечает наш респондент.

Атрофический кольпит — симптомокомплекс, имеющий причиной значительное снижение содержания эстрогенов, который приводит к истончению многослойного плоского эпителия.

«Цитологическое исследование является одним из основных методов объективной диагностики атрофического кольпита», - утверждает Валерий Иванович.

Рис. 5. Атрофический кольпит

Помимо гинекологических исследований, Валерий Иванович проводит диагностику узлов щитовидной железы (Рис. 6 ). «На данной микрофотографии мы можем наблюдать нормальные клетки эпителия щитовидной железы (ЩЖ) в массе растворимого, продуцируемого ими, коллоида (уплотненного слизеподобного вещества). Во взятом мазке выражена вакуолизация, то есть разновидность клеточной дистрофии, характеризующаяся образованием в цитоплазме вакуолей. Это говорит о различных нарушениях в обмене веществ клеток, в их функции и строении», - сообщает Валерий Иванович.

Коллоидный зоб ЩЖ - заболевание, развивающееся в результате йододефицита. В качестве профилактики для предотвращения узловых образований достаточно потреблять йод и витамины.

Рис. 6. Преимущественно коллоидный зоб

«Также я исследую мазки, приготовленные из пунктата. Пунктат - это небольшое количество ткани или жидкости, извлеченное путем пункции тонкой иглой. На следующей микрофотографии зафиксировано исследование пунктата из узлового образования ЩЖ (Рис. 7 ).

В данном случае он представляет собой мономорфные (сохраняющие одну форму в течение всего периода развития) мелкие клетки ЩЖ типа А в небольших скоплениях. Наблюдается склонность к образованию микрофолликулярных структур (полоски, розетки), то есть имеется подозрение на аденому.

Мономорфная аденома — это, проще говоря, одиночный, плотный узел, который расположен в глубине железы.

Но не нужно пугаться данного диагноза, аденома щитовидной железы - доброкачественная опухоль и она редко переходит в злокачественную»

Рис. 7. Аденома щитовидной железы

Цитология применяется в том числе и для обследования желудка — по материалам, полученным при эндоскопии (Рис. 8 ). В программе Altami Studio был измерен диаметр ядра клеток эпителия желудка. «Это нормальные клетки эпителия, диаметр одного из самых больших ядер равен 54.7449 мкм», - замечает Ключников В. И.

Рис. 8. Эндоскопический материал из желудка

«Для подсчета элементов крови, их концентрации и определения подвижности я использую камеру Горяева (Рис. 9). Она откалибрована в программе Altami Studio. При помощи камеры Горяева мне удобно определять увеличение микроскопа. Я ее использую исключительно как калибратор».

Рис. 9. Камера Горяева

«Цитология - наука достаточно сложная и, к тому же, субъективная. По этой причине у врача-цитолога должна быть не только соответствующая квалификация, но и большой опыт работы в области цитологии», - делится Валерий Иванович. «Цитологические исследования нужны для д иагностики различных состояний шейки матки, для исследования новообразований щитовидной железы и для других профилактических осмотров. В настоящее время цитологическими исследованиями, получившими признание и широкое распространение, достигаются большие успехи в обеспечении здоровья населения», - считает врач-цитолог Ключников Валерий Иванович.

Основными методами цитологических исследований являются световая и электронная микроскопия , т. е. использование световых и электронных микроскопов, позволяющих увидеть внешнее и внутреннее строения клеток.

Световые микроскопы позволяют в том числе наблюдать и за живыми клетками (обычно для этого используются одноклеточные организмы, клетки крови). Однако разрешающая способность световых микроскопов не так велика как у электронных. Разрешающая способность увеличительного прибора - это минимальное расстояние между двумя видимыми отдельно точками. У световых микроскопов это расстояние измеряется сотнями нанометров, а у электронных - десятками и единицами нанометров. Если в первых используется световой поток (разрешающая способность обратнопропорционально зависит от длины волны), то во вторых - поток электронов.

Существует два вида электронных микроскопов - просвечивающие и сканирующие. Разрешающая способность первых несколько выше, однако с помощью вторых можно получить объемное изображение. Для просвечивающих микроскопов готовят очень тонкие срезы, через которые проходит пучок электронов. В сканирующих микроскопах пучок электронов отражается от объекта.

В цитологических исследованиях также используется метод флуоресцентной микроскопии , который заключается в том, что к живым клеткам добавляются определенные красящие вещества, которые, соединяясь с различными компонентами клетки, начинают светиться. Таким образом, можно в световой микроскоп наблюдать клеточные структуры (хлоропласты, микротрубочки и др.).

Кроме микроскопии в современной цитологии используются и другие методы исследования. Цитохимический метод позволяет изучать химический состав клеток. Данный метод базируется на химических реакциях определенных веществ. Добавляя реагенты к клеткам, можно выявить наличие в них ДНК, определенных белков и др., а также определить их количество.

Метод радиоавтографии предполагает введение вещества, содержащего меченые (радиоактивные) атомы. Меченые молекулы через некоторое время включаются в биополимеры клетки, и по ним можно отследить протекание метаболических процессов в клетке.

С 20-х годов XX века хорошо известен такой метод цитологических исследований как центрифугирование (или метод фракционирования клеточных структур) . Он основан на том, что клеточные структуры имеют разную массу и при центрифугировании осаждаются с разной скоростью. Таким образом, если разрушить клетки, то после центрифуги смесь разделится на фракции, где внизу будут находиться более тяжелые структуры (обычно это клеточные ядра), а вверху - более легкие.

Относительно новым является метод клеточных культур , позволяющий вне организма в специально созданных условиях выращивать одинаковые клетки (колонии) из одной или нескольких исходных. Данный метод позволяет отдельно от организма изучать свойства его клеток, проводить цитологические, генетические и другие исследования.

Новым методом цитологических исследования является метод микрохирургии . С помощью микроманипулятора, соединенного с микроскопом, из клеток извлекают или вносят различные компоненты, вводят вещества.